RESUMEN Y EXPLICACIÓN LA PRUEBA
La malaria es una enfermedad febril, hemolítica y transmitida por mosquitos que infecta a más de 200 millones de personas y mata a más de 1 millón de personas por año.Es causada por cuatro especies de Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale y P. malariae.Todos estos plasmodios infectan y destruyen los eritrocitos humanos, produciendo escalofríos, fiebre, anemia y esplenomegalia.P. falciparum causa una enfermedad más grave que las otras especies de plasmodios y representa la mayoría de las muertes por paludismo.P. falciparum y P. vivax son los patógenos más comunes, sin embargo, existe una variación geográfica considerable en la distribución de especies.
Tradicionalmente, el paludismo se diagnostica mediante la demostración de los organismos en frotis gruesos de sangre periférica teñidos con Giemsa, y las diferentes especies de plasmodium se distinguen por su aparición en los eritrocitos infectados1.La técnica es capaz de realizar diagnósticos precisos y confiables, pero solo cuando la realizan microscopistas expertos que utilizan protocolos definidos2, lo que presenta grandes obstáculos para las áreas remotas y pobres del mundo.
El kit de prueba rápida de malaria Pf / Pan Antigen está desarrollado para resolver estos obstáculos.La prueba utiliza un par de anticuerpos monoclonales y policlonales contra la proteína específica de P. falciparum, Histidine Repeat Protein II (pHRP-II), y un par de anticuerpos monoclonales contra la lactato deshidrogenasa de plasmodio (pLDH), una proteína producida por las cuatro especies del plasmodio, lo que permite la detección y diferenciación simultáneas de la infección por P. falciparum o cualquiera de los otros tres plasmodios.Puede ser realizado por personal no capacitado o mínimamente capacitado, sin equipo de laboratorio.
PRINCIPIO
El kit de prueba rápida Pf/ Pan Malaria es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral.Los componentes de la tira reactiva consisten en: 1) una almohadilla de conjugado de color burdeos que contiene anticuerpo anti-pHRP-II de ratón conjugado con oro coloidal (conjugados de pHRP II-oro) y anticuerpo anti-pLDH de ratón conjugado con oro coloidal (conjugados de pLDH-oro),
2) una tira de membrana de nitrocelulosa que contiene dos bandas de prueba (bandas Pan y Pv) y una banda de control (banda C).La banda Pan está recubierta previamente con un anticuerpo monoclonal anti-pLDH mediante el cual se puede detectar la infección con cualquiera de las cuatro especies de plasmodios, la banda Pf está recubierta previamente con anticuerpos policlonales anti-pHRP-II para la detección de la infección por Pf y la banda C está recubierta con IgG anti-ratón de cabra.
Durante el ensayo, se dispensa un volumen adecuado de muestra de sangre en el pozo de muestra (S) del casete de prueba, se agrega un tampón de lisis al pozo de tampón (B).El tampón contiene un detergente que lisa los glóbulos rojos y libera varios antígenos de plasmodio, que migran por acción capilar a través de la tira contenida en el casete.pHRP-II, si está presente en la muestra, se unirá a los conjugados pHRP II-oro.Luego, el inmunocomplejo es capturado en la membrana por los anticuerpos anti-pHRPII recubiertos previamente, formando una banda Pf de color burdeos, lo que indica un resultado positivo de la prueba Pf.La pLDH, si está presente en la muestra, se unirá a los conjugados de pLDH con oro.Luego, el inmunocomplejo es capturado en la membrana por el anticuerpo anti pLDH previamente recubierto, formando una banda de Pan de color burdeos, lo que indica un resultado positivo de la prueba de plasmodium.En ausencia de la banda Pan, se puede recomendar un resultado positivo de la prueba para cualquiera de los otros tres plasmodios.
La ausencia de bandas de prueba (Pan y Pf) sugiere un resultado negativo.La prueba contiene un control interno (banda C) que debe exhibir una banda de color burdeos del inmunocomplejo de cabra anti-ratón IgG / ratón IgG (pHRP-II y pLDH-oro conjugados) independientemente del desarrollo de color en cualquiera de las bandas de prueba.De lo contrario, el resultado de la prueba no es válido y la muestra debe volver a analizarse con otro dispositivo.
